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猪蓝耳病抗原检测试剂盒 使用说明书

猪蓝耳病抗原检测试剂盒

使用说明书

版号:PRRS se141201

介绍

猪蓝耳病又名猪繁殖与呼吸综合症Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的急性、高度传染的病毒性传染病。

猪蓝耳病抗原检测试剂盒利用ELISA检测技术,以对猪血液和组织匀浆液中蓝耳病抗原进行定性检测

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2块

7

显色液

6/11ml

2

酶结合物

11/21ml

8

终止液

6/11ml

3

浓缩的单抗

110/210ul

9

阴性对照

50/100µl

4

单抗稀释液

11/21ml

10

阳性对照

50/100µl

5

10倍浓缩洗涤液

50ml

11

封板膜

2/4张

6

底物液

6/11ml

12

说明书

1份

 

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

血液样本:取抗凝全血,或按常规方法制备血清。

组织样本:解剖待检猪,找到病变组织。剪下一块病变组织,加入约十倍体积的生理盐水,然后用合适的工具将组织与样品缓冲液一起匀浆。静置2-3分钟,使大颗粒沉淀。取上清进行检测。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

单抗工作液的准备(现配现用)

先计算好单抗工作液的用量,再将101倍浓缩的单抗按1:101的体积比用单抗稀释液稀释(例如:900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的单抗,可以满足10个微孔的用量;每次稀释时应多稀释100μl,以避免加样时的损耗而造成液体量不足)。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),加入待检血清10μl到检测板孔底,同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中,立即加入90μl单抗工作液,空白对照仅加入100μl单抗稀释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

2. 盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔(约350μl),静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。

4. 除空白孔外,每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔显色液100µl,混匀、盖上封板膜37闭光显色10分钟

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

1、 结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

2、 试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.15,同时阳性对照(P)OD值〉0.5。

3、 计算方法:

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

4、 阴阳性判断:

S/P值0.3判断为阳性;

S/P值<0.3判断为阴性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com


猪蓝耳病抗原检测试剂盒 使用说明书

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猪蓝耳病又名猪繁殖与呼吸综合症Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的急性、高度传染的病毒性传染病。

猪蓝耳病抗原检测试剂盒利用ELISA检测技术,以对猪血液和组织匀浆液中蓝耳病抗原进行定性检测

 

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1

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显色液

6/11ml

2

酶结合物

11/21ml

8

终止液

6/11ml

3

浓缩的单抗

110/210ul

9

阴性对照

50/100µl

4

单抗稀释液

11/21ml

10

阳性对照

50/100µl

5

10倍浓缩洗涤液

50ml

11

封板膜

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6

底物液

6/11ml

12

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需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

血液样本:取抗凝全血,或按常规方法制备血清。

组织样本:解剖待检猪,找到病变组织。剪下一块病变组织,加入约十倍体积的生理盐水,然后用合适的工具将组织与样品缓冲液一起匀浆。静置2-3分钟,使大颗粒沉淀。取上清进行检测。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

单抗工作液的准备(现配现用)

先计算好单抗工作液的用量,再将101倍浓缩的单抗按1:101的体积比用单抗稀释液稀释(例如:900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的单抗,可以满足10个微孔的用量;每次稀释时应多稀释100μl,以避免加样时的损耗而造成液体量不足)。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),加入待检血清10μl到检测板孔底,同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中,立即加入90μl单抗工作液,空白对照仅加入100μl单抗稀释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

2. 盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔(约350μl),静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。

4. 除空白孔外,每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔显色液100µl,混匀、盖上封板膜37闭光显色10分钟

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

1、 结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

2、 试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.15,同时阳性对照(P)OD值〉0.5。

3、 计算方法:

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

4、 阴阳性判断:

S/P值0.3判断为阳性;

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