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猪蓝耳病抗原检测试剂盒
使用说明书
版号:PRRS se141201
介绍
猪蓝耳病又名猪繁殖与呼吸综合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的急性、高度传染的病毒性传染病。
猪蓝耳病抗原检测试剂盒是利用ELISA检测技术,以对猪血液中和组织匀浆液中的蓝耳病抗原进行定性检测。
组份
1 | 抗原预包被板条 | 1/2块 | 7 | 显色液 | 6/11ml |
2 | 酶结合物 | 11/21ml | 8 | 终止液 | 6/11ml |
3 | 浓缩的单抗 | 110/210ul | 9 | 阴性对照 | 50/100µl |
4 | 单抗稀释液 | 11/21ml | 10 | 阳性对照 | 50/100µl |
5 | 10倍浓缩洗涤液 | 50ml | 11 | 封板膜 | 2/4张 |
6 | 底物液 | 6/11ml | 12 | 说明书 | 1份 |
需自备的设备及试剂
1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
样品制备
血液样本:取抗凝全血,或按常规方法制备血清。
组织样本:解剖待检猪,找到病变组织。剪下一块病变组织,加入约十倍体积的生理盐水,然后用合适的工具将组织与样品缓冲液一起匀浆。静置2-3分钟,使大颗粒沉淀。取上清进行检测。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
单抗工作液的准备(现配现用)
先计算好单抗工作液的用量,再将101倍浓缩的单抗按1:101的体积比用单抗稀释液稀释(例如:900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的单抗,可以满足10个微孔的用量;每次稀释时应多稀释100μl,以避免加样时的损耗而造成液体量不足)。
注意事项
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
操作步骤
1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),加入待检血清10μl到检测板孔底,同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中,立即加入90μl单抗工作液,空白对照仅加入100μl单抗稀释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
2. 盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔(约350μl),静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。
4. 除空白孔外,每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6. 每孔先加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
1、 结果判定
用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。
2、 试验成立的条件是:
阴性对照(N)OD值<0.15,同时阳性对照(P)OD值〉0.5。
3、 计算方法:
样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值
4、 阴阳性判断:
S/P值≥0.3判断为阳性;
S/P值<0.3判断为阴性。
有效期
贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。
有效期: 12个月。
南京杜佰生物科技有限公司 出品
电话: 025-6611 8188/6601 8988
手机:178 9500 6881
网址: www.bioduby.com
邮箱: bioduby@163.com
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猪蓝耳病又名猪繁殖与呼吸综合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)引起的一种以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的急性、高度传染的病毒性传染病。
猪蓝耳病抗原检测试剂盒是利用ELISA检测技术,以对猪血液中和组织匀浆液中的蓝耳病抗原进行定性检测。
组份
1 | 抗原预包被板条 | 1/2块 | 7 | 显色液 | 6/11ml |
2 | 酶结合物 | 11/21ml | 8 | 终止液 | 6/11ml |
3 | 浓缩的单抗 | 110/210ul | 9 | 阴性对照 | 50/100µl |
4 | 单抗稀释液 | 11/21ml | 10 | 阳性对照 | 50/100µl |
5 | 10倍浓缩洗涤液 | 50ml | 11 | 封板膜 | 2/4张 |
6 | 底物液 | 6/11ml | 12 | 说明书 | 1份 |
需自备的设备及试剂
1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
样品制备
血液样本:取抗凝全血,或按常规方法制备血清。
组织样本:解剖待检猪,找到病变组织。剪下一块病变组织,加入约十倍体积的生理盐水,然后用合适的工具将组织与样品缓冲液一起匀浆。静置2-3分钟,使大颗粒沉淀。取上清进行检测。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
单抗工作液的准备(现配现用)
先计算好单抗工作液的用量,再将101倍浓缩的单抗按1:101的体积比用单抗稀释液稀释(例如:900μl单抗稀释液中加9μl浓缩的单抗,可以满足10个微孔的用量;每次稀释时应多稀释100μl,以避免加样时的损耗而造成液体量不足)。
注意事项
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
操作步骤
1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),加入待检血清10μl到检测板孔底,同时设阴性、阳性及空白对照各1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中,立即加入90μl单抗工作液,空白对照仅加入100μl单抗稀释液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
2. 盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔(约350μl),静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。
4. 除空白孔外,每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同2。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6. 每孔先加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
1、 结果判定
用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。
2、 试验成立的条件是:
阴性对照(N)OD值<0.15,同时阳性对照(P)OD值〉0.5。
3、 计算方法:
样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值
4、 阴阳性判断:
S/P值≥0.3判断为阳性;
S/P值<0.3判断为阴性。
有效期
贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。
有效期: 12个月。
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