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O型口蹄疫多肽疫苗免疫 抗体检测试剂盒使用说明书

O型口蹄疫多肽疫苗免疫

抗体检测试剂盒使用说明书

版号:fmd se17051011

介绍

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)多肽疫苗免疫抗体检测试剂盒用于检测猪、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗体,用于评估口蹄疫多肽疫苗免疫状况。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被口蹄疫病毒抗原。在试验中,加入待检血清与酶结合物,经过温育后,若样品中含有口蹄疫病毒特异性抗体,则与酶结合物中的酶标记抗体竞争板孔中包被的抗原表位,温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除;在微孔中加入TMB显色液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2块

6

样本稀释液

8ml

2

酶结合物

7/14ml

7

终止液

15ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

8

阴性对照

0.25/0.5ml

4

显色液

11/22ml

9

阳性对照

0.15/0.3ml

5

说明书

1份

10

封板膜

2/4张

 

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 抗原包被板为一次性用品,不得重复使用; 

 

操作步骤

1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔。

2. 将待检板条按20ul/孔加入样本稀释液;

3. 将样品和阴阳性对照品按20ul/孔加入孔内(移液器枪头请勿混用);

4. 每孔加酶结合物60μl,轻微震荡混匀,盖上封板膜,置37℃温育45分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

 阴性对照(N)OD值>0.5,同时阳性对照(P)阻断率>45%;

计算方法:

PI (阻断率)= {1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)}×100%

阴阳性判断:

 

PI(阻断率)>45%则判断为阳性;

PI45%则判断为阴性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

 

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com


O型口蹄疫多肽疫苗免疫 抗体检测试剂盒使用说明书

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口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)多肽疫苗免疫抗体检测试剂盒用于检测猪、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗体,用于评估口蹄疫多肽疫苗免疫状况。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被口蹄疫病毒抗原。在试验中,加入待检血清与酶结合物,经过温育后,若样品中含有口蹄疫病毒特异性抗体,则与酶结合物中的酶标记抗体竞争板孔中包被的抗原表位,温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除;在微孔中加入TMB显色液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2块

6

样本稀释液

8ml

2

酶结合物

7/14ml

7

终止液

15ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

8

阴性对照

0.25/0.5ml

4

显色液

11/22ml

9

阳性对照

0.15/0.3ml

5

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需自备的设备及试剂

1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 抗原包被板为一次性用品,不得重复使用; 

 

操作步骤

1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔。

2. 将待检板条按20ul/孔加入样本稀释液;

3. 将样品和阴阳性对照品按20ul/孔加入孔内(移液器枪头请勿混用);

4. 每孔加酶结合物60μl,轻微震荡混匀,盖上封板膜,置37℃温育45分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

 阴性对照(N)OD值>0.5,同时阳性对照(P)阻断率>45%;

计算方法:

PI (阻断率)= {1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)}×100%

阴阳性判断:

 

PI(阻断率)>45%则判断为阳性;

PI45%则判断为阴性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

 

 

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