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禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒使用说明书

禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒使用说明书

 

版号:P27 se150801

 

介绍

本试剂盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的检测。

本试剂盒是采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)原理来检测禽白血病病毒的P27抗原。检测时,在相应的反应孔中加入阴、阳对照品和待测样品,经温育后,若样品中含有P27抗原,则与酶标板上的抗体结合形成抗原抗体复合物,反之则不能结合。洗涤后,加入的酶标记物与包被板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再次洗涤后加入底物,酶催化底物反应呈现蓝色,颜色深浅与样品中P27抗原的含量成正相关,从而达到快速检测的目的。

 

组份

1

预包被板条

1/2块

7

阴性对照

2ml

2

酶结合物

11/22ml

8

阳性对照

2ml

3

25倍浓缩洗涤液

30/60ml

9

封板膜

2/4张

4

底物A液

8/16ml

10

说明书

1份

5

底物B液

8/16ml




6

终止液

6/11ml




 

 

需自备的设备及试剂

酶标仪(650 nm)、去离子水、离心管、微量移液器、计时器、离心机(4000r/min)、棉签、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。

 

注意事项

 

1.   本品仅供体外检测使用。

 

2.   不同批号试剂盒中的组份不可混用。

 

3. 勿使用过期的试剂盒,已开封的组份应在有效期内       使用。

 

4. 必须使用符合药典规定的水(如蒸馏水、去离子水或纯水)稀释洗涤液。

 

5. 试剂盒各组份在使用前应预先平衡至室温(25±2℃)。

 

6. 未使用的酶标板应放回铝箔袋并封口,2-8℃保存。

 

7. 应避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。

 

8. 勿将底物溶液暴露于强光下。

 

9. 本品终止液为强酸,避免同眼、皮肤接触。

 

10. 移液系统应保证准确清洁,应提供准确溶液体积的同时不造成交叉污染。

 

操作方法

一:试剂配制

a0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:准确称取氯化钠 8.0 g、氯化钾 0.2 g、磷酸氢二钠1.14 g和磷酸二氢钾0.24 g,加入去离子水溶解并定容至1 L

b)洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5-10 min),然后用蒸馏水作25 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 720 mL 蒸馏水)匀,稀释好的洗涤液2-8℃可存放7日。

二:样品处理

1. 蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL

2. 泄殖腔拭子:取棉签于待检鸡只泄殖腔取样,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/LpH  7.4)中,-20℃以下冰箱中冻融一次,待其恢复至室温后,取 100 μL 进行检测。

3. 疫苗:疫苗稀释液将疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀释10-20倍后,取100μL进行检测。

4. 胎粪:无需稀释,可以直接用于检测,若样品中含有沉淀或杂质,需在2000-3000 r/min,离心 10 min,取 100 μL 上清进行检测。

三:操作步骤

1. 取酶标板(根据样品多少,可拆开分次使用),阴性对照、阳性对照和待检样品各取100 µL加至相应微孔中,盖好盖板膜,轻轻振荡酶标板10 s,充分混

匀,室温下(25±2℃)避光反应60 min

注:阴、阳性对照各设2孔,待检样品设1孔。

2. 甩掉孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300μL,震荡洗涤4次,每次30s 左右,在干净吸水纸上拍打去除残存洗涤液。

3. 每孔加入100μL酶标记物工作液,盖好盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应60 min

4. 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2

5. 底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)反应15 min

注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min内使用。

6. 每孔加入终止液100μL5 min内测定结果。

注:若终止液出现絮状结晶,可37℃加热,待其溶解后使用。

 

结果判定

 

1. 在酶标仪上读各孔OD650nm值,计算出阴性对照孔OD均值NC和阳性对照孔OD均值PC

注:NC值<0.2000.500PC2.000,试验结果才有效。否则,应进行重复试验。

2. 按照公式计算出S/P值:S/P=SC-NC/PC-NC)。

注:SC为被检样品孔OD值。

3. 如果S/P0.17,说明样品中无禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P0.17,说明样品中有禽白血病病毒P27蛋白。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 


南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com




禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒使用说明书

禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒使用说明书

 

版号:P27 se150801

 

介绍

本试剂盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的检测。

本试剂盒是采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)原理来检测禽白血病病毒的P27抗原。检测时,在相应的反应孔中加入阴、阳对照品和待测样品,经温育后,若样品中含有P27抗原,则与酶标板上的抗体结合形成抗原抗体复合物,反之则不能结合。洗涤后,加入的酶标记物与包被板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再次洗涤后加入底物,酶催化底物反应呈现蓝色,颜色深浅与样品中P27抗原的含量成正相关,从而达到快速检测的目的。

 

组份

1

预包被板条

1/2块

7

阴性对照

2ml

2

酶结合物

11/22ml

8

阳性对照

2ml

3

25倍浓缩洗涤液

30/60ml

9

封板膜

2/4张

4

底物A液

8/16ml

10

说明书

1份

5

底物B液

8/16ml




6

终止液

6/11ml




 

 

需自备的设备及试剂

酶标仪(650 nm)、去离子水、离心管、微量移液器、计时器、离心机(4000r/min)、棉签、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。

 

注意事项

 

1.   本品仅供体外检测使用。

 

2.   不同批号试剂盒中的组份不可混用。

 

3. 勿使用过期的试剂盒,已开封的组份应在有效期内       使用。

 

4. 必须使用符合药典规定的水(如蒸馏水、去离子水或纯水)稀释洗涤液。

 

5. 试剂盒各组份在使用前应预先平衡至室温(25±2℃)。

 

6. 未使用的酶标板应放回铝箔袋并封口,2-8℃保存。

 

7. 应避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。

 

8. 勿将底物溶液暴露于强光下。

 

9. 本品终止液为强酸,避免同眼、皮肤接触。

 

10. 移液系统应保证准确清洁,应提供准确溶液体积的同时不造成交叉污染。

 

操作方法

一:试剂配制

a0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:准确称取氯化钠 8.0 g、氯化钾 0.2 g、磷酸氢二钠1.14 g和磷酸二氢钾0.24 g,加入去离子水溶解并定容至1 L

b)洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5-10 min),然后用蒸馏水作25 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 720 mL 蒸馏水)匀,稀释好的洗涤液2-8℃可存放7日。

二:样品处理

1. 蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL

2. 泄殖腔拭子:取棉签于待检鸡只泄殖腔取样,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/LpH  7.4)中,-20℃以下冰箱中冻融一次,待其恢复至室温后,取 100 μL 进行检测。

3. 疫苗:疫苗稀释液将疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀释10-20倍后,取100μL进行检测。

4. 胎粪:无需稀释,可以直接用于检测,若样品中含有沉淀或杂质,需在2000-3000 r/min,离心 10 min,取 100 μL 上清进行检测。

三:操作步骤

1. 取酶标板(根据样品多少,可拆开分次使用),阴性对照、阳性对照和待检样品各取100 µL加至相应微孔中,盖好盖板膜,轻轻振荡酶标板10 s,充分混

匀,室温下(25±2℃)避光反应60 min

注:阴、阳性对照各设2孔,待检样品设1孔。

2. 甩掉孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300μL,震荡洗涤4次,每次30s 左右,在干净吸水纸上拍打去除残存洗涤液。

3. 每孔加入100μL酶标记物工作液,盖好盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应60 min

4. 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2

5. 底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)反应15 min

注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min内使用。

6. 每孔加入终止液100μL5 min内测定结果。

注:若终止液出现絮状结晶,可37℃加热,待其溶解后使用。

 

结果判定

 

1. 在酶标仪上读各孔OD650nm值,计算出阴性对照孔OD均值NC和阳性对照孔OD均值PC

注:NC值<0.2000.500PC2.000,试验结果才有效。否则,应进行重复试验。

2. 按照公式计算出S/P值:S/P=SC-NC/PC-NC)。

注:SC为被检样品孔OD值。

3. 如果S/P0.17,说明样品中无禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P0.17,说明样品中有禽白血病病毒P27蛋白。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 


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