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禽白血病P27抗原检测试剂盒 使用说明书
禽白血病P27抗原检测试剂盒
使用说明书
版号：ALV-p27 se190415
介绍
禽白血病（Avian Leukosis,AL）P27抗原检测试剂盒用于检测禽血液、粪便、泄殖腔式子、蛋清中的禽白血病P27抗原。
本试剂盒采用夹心ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的抗禽白血病P27单抗。在试验中，样本中的抗原与包被板上的抗体结合，经洗涤除去未结合的抗原和其它成份后，再加入酶标单抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合，再经洗涤除去未结合的酶结合物，在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 | 预包被板条 | 1块 | 6 | 终止液 | 15ml |
2 | 酶结合物 | 11ml | 7 | 阴性对照 | 0.5 ml |
3 | 10倍浓缩洗涤液 | 100ml | 8 | 阳性对照 | 0.5 ml |
4 | 显色液 | 11ml | 9 | 封板膜 | 2/4张 |
5 | 样本稀释液 | 100ml | 10 | 说明书 | 1份 |
需自备的设备及试剂
微量移液器： 0.5µl-10μl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
一次性移液器吸头。
量筒：500ml。
96孔板酶标仪。
蒸馏水或去离子水。
洗瓶或洗板机。
样品制备
血液：取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
粪便或拭子：用棉签从泄殖腔采集样品，棉签应插入泄殖腔，并在内壁上反复旋转擦拭。对于幼小的禽鸟，也可用棉签直接蘸取新鲜粪便。吸取1ml样本稀释液于离心管中，将蘸取样本的棉签插入稀释液离心管中，并在管壁上反复用力旋转至少10次，混匀溶液，使标本尽可能溶解在溶液中。在液面上方的试管壁上挤压棉签，使液体尽可能被挤出，丢弃棉签，静置5分钟,吸取上清作为待检样本。（样本处理后，请在30分钟内进行检测）
蛋清：吸取1ml的蛋清到离心管中，并冻融3次后才能作为待检样本。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
注意事项
试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗体包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
操作步骤
取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入50μl样本稀释液，将待检样品与阴阳性对照品取50μl加入到检测板孔中，阴阳性对照各设2孔，轻轻震匀（勿溢出）。
盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250μl，后甩去孔内液体，以上步骤重复6次，最后在干净吸水纸上拍干。
每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育60分钟。
小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤6次, 方法同3，切记最后在干净吸水纸上拍干。
每孔加显色液100μl，轻微震荡混匀，盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
结果判定
用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。
试验成立的条件是：
阴性对照（N）OD值<0.25，同时阳性对照（P）OD值〉0.7。
计算方法：
阴阳性判断：
≥ 20判断为阳性；
< 20判断为阴性。
有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。
南京杜佰生物科技有限公司 出品
电话: 025-6611 8188/6601 8988
手机：178 9500 6881
网址: www.bioduby.com
邮箱: bioduby@163.com
禽白血病P27抗原检测试剂盒 使用说明书
禽白血病P27抗原检测试剂盒
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介绍
禽白血病（Avian Leukosis,AL）P27抗原检测试剂盒用于检测禽血液、粪便、泄殖腔式子、蛋清中的禽白血病P27抗原。
本试剂盒采用夹心ELISA法，在酶标板条微孔上预包被纯化的抗禽白血病P27单抗。在试验中，样本中的抗原与包被板上的抗体结合，经洗涤除去未结合的抗原和其它成份后，再加入酶标单抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合，再经洗涤除去未结合的酶结合物，在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 | 预包被板条 | 1块 | 6 | 终止液 | 15ml |
2 | 酶结合物 | 11ml | 7 | 阴性对照 | 0.5 ml |
3 | 10倍浓缩洗涤液 | 100ml | 8 | 阳性对照 | 0.5 ml |
4 | 显色液 | 11ml | 9 | 封板膜 | 2/4张 |
5 | 样本稀释液 | 100ml | 10 | 说明书 | 1份 |
需自备的设备及试剂
微量移液器： 0.5µl-10μl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
一次性移液器吸头。
量筒：500ml。
96孔板酶标仪。
蒸馏水或去离子水。
洗瓶或洗板机。
样品制备
血液：取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
粪便或拭子：用棉签从泄殖腔采集样品，棉签应插入泄殖腔，并在内壁上反复旋转擦拭。对于幼小的禽鸟，也可用棉签直接蘸取新鲜粪便。吸取1ml样本稀释液于离心管中，将蘸取样本的棉签插入稀释液离心管中，并在管壁上反复用力旋转至少10次，混匀溶液，使标本尽可能溶解在溶液中。在液面上方的试管壁上挤压棉签，使液体尽可能被挤出，丢弃棉签，静置5分钟,吸取上清作为待检样本。（样本处理后，请在30分钟内进行检测）
蛋清：吸取1ml的蛋清到离心管中，并冻融3次后才能作为待检样本。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
注意事项
试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗体包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
操作步骤
取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），每孔加入50μl样本稀释液，将待检样品与阴阳性对照品取50μl加入到检测板孔中，阴阳性对照各设2孔，轻轻震匀（勿溢出）。
盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育60分钟。
小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250μl，后甩去孔内液体，以上步骤重复6次，最后在干净吸水纸上拍干。
每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育60分钟。
小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤6次, 方法同3，切记最后在干净吸水纸上拍干。
每孔加显色液100μl，轻微震荡混匀，盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
结果判定
用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。
试验成立的条件是：
阴性对照（N）OD值<0.25，同时阳性对照（P）OD值〉0.7。
计算方法：
阴阳性判断：
≥ 20判断为阳性；
< 20判断为阴性。
有效期
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。
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