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禽白血病P27抗原检测试剂盒 使用说明书

禽白血病P27抗原检测试剂盒

使用说明书

版号:ALV-p27 se190415

介绍

禽白血病(Avian Leukosis,AL)P27抗原检测试剂盒用于检测禽血液、粪便、泄殖腔式子、蛋清中的禽白血病P27抗原。

本试剂盒采用夹心ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的抗禽白血病P27单抗。在试验中,样本中的抗原与包被板上的抗体结合,经洗涤除去未结合的抗原和其它成份后,再加入酶标单抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

预包被板条

1块

6

终止液

15ml

2

酶结合物

11ml

7

阴性对照

0.5 ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

8

阳性对照

0.5 ml

4

显色液

11ml

9

封板膜

2/4张

5

样本稀释液

100ml

10

说明书

1份

 

需自备的设备及试剂

微量移液器: 0.5µl-10μl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

一次性移液器吸头。

量筒:500ml。

96孔板酶标仪。

蒸馏水或去离子水。

洗瓶或洗板机。

 

样品制备

血液:取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

粪便或拭子:用棉签从泄殖腔采集样品,棉签应插入泄殖腔,并在内壁上反复旋转擦拭。对于幼小的禽鸟,也可用棉签直接蘸取新鲜粪便。吸取1ml样本稀释液于离心管中,将蘸取样本的棉签插入稀释液离心管中,并在管壁上反复用力旋转至少10次,混匀溶液,使标本尽可能溶解在溶液中。在液面上方的试管壁上挤压棉签,使液体尽可能被挤出,丢弃棉签,静置5分钟,吸取上清作为待检样本。(样本处理后,请在30分钟内进行检测)

蛋清:吸取1ml的蛋清到离心管中,并冻融3次后才能作为待检样本。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。

不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗体包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。

所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),每孔加入50μl样本稀释液,将待检样品与阴阳性对照品取50μl加入到检测板孔中,阴阳性对照各设2孔,轻轻震匀(勿溢出)。

盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250μl,后甩去孔内液体,以上步骤重复6次,最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤6次, 方法同3,切记最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加显色液100μl,轻微震荡混匀,盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.25,同时阳性对照(P)OD值〉0.7。

计算方法:

 

阴阳性判断:

 20判断为阳性;

< 20判断为阴性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com


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禽白血病(Avian Leukosis,AL)P27抗原检测试剂盒用于检测禽血液、粪便、泄殖腔式子、蛋清中的禽白血病P27抗原。

本试剂盒采用夹心ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的抗禽白血病P27单抗。在试验中,样本中的抗原与包被板上的抗体结合,经洗涤除去未结合的抗原和其它成份后,再加入酶标单抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

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1

预包被板条

1块

6

终止液

15ml

2

酶结合物

11ml

7

阴性对照

0.5 ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

8

阳性对照

0.5 ml

4

显色液

11ml

9

封板膜

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5

样本稀释液

100ml

10

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需自备的设备及试剂

微量移液器: 0.5µl-10μl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

一次性移液器吸头。

量筒:500ml。

96孔板酶标仪。

蒸馏水或去离子水。

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样品制备

血液:取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

粪便或拭子:用棉签从泄殖腔采集样品,棉签应插入泄殖腔,并在内壁上反复旋转擦拭。对于幼小的禽鸟,也可用棉签直接蘸取新鲜粪便。吸取1ml样本稀释液于离心管中,将蘸取样本的棉签插入稀释液离心管中,并在管壁上反复用力旋转至少10次,混匀溶液,使标本尽可能溶解在溶液中。在液面上方的试管壁上挤压棉签,使液体尽可能被挤出,丢弃棉签,静置5分钟,吸取上清作为待检样本。(样本处理后,请在30分钟内进行检测)

蛋清:吸取1ml的蛋清到离心管中,并冻融3次后才能作为待检样本。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。

不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗体包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。

所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),每孔加入50μl样本稀释液,将待检样品与阴阳性对照品取50μl加入到检测板孔中,阴阳性对照各设2孔,轻轻震匀(勿溢出)。

盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250μl,后甩去孔内液体,以上步骤重复6次,最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤6次, 方法同3,切记最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加显色液100μl,轻微震荡混匀,盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.25,同时阳性对照(P)OD值〉0.7。

计算方法:

 

阴阳性判断:

 20判断为阳性;

< 20判断为阴性。

 

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