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鸡白痢鸡伤寒抗体检测试剂盒 使用说明书

鸡白痢鸡伤寒抗体检测试剂盒

使用说明书

版号:pd&ft se18052311

介绍

鸡白痢(Pullorum Disease,PD)鸡伤寒(Fowl Typhoid,FT)抗体检测试剂盒检测鸡血清中的鸡白痢鸡伤寒抗体,用于鸡群的鸡白痢鸡伤寒的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被鸡白痢鸡伤寒抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有鸡白痢鸡伤寒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原包被板条

1/2块

7

阴性对照

2ml

2

酶结合物

11/22ml

8

阳性对照

1.6ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

9

血清稀释板

1/2块

4

显色液

11/22ml

10

封板膜

2/4张

5

样本稀释液

100ml

11

说明书

1份

6

终止液

15ml




 

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

样品的稀释

在血清稀释板中按1:100的体积比稀释待检血清。

注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔,阳性对照2孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

2. 盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

4. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次, 方法同3切记最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100µl,轻微震荡混匀、盖上封板膜37闭光显色10分钟

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.2,同时阳性对照(P)OD值〉0.4。

计算方法:

样品OD值÷阳性对照OD均值= S/P值

阴阳性判断:

S/P<0.35判为阴性;

S/P0.35判为阳性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com


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本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被鸡白痢鸡伤寒抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有鸡白痢鸡伤寒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原包被板条

1/2块

7

阴性对照

2ml

2

酶结合物

11/22ml

8

阳性对照

1.6ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

9

血清稀释板

1/2块

4

显色液

11/22ml

10

封板膜

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样本稀释液

100ml

11

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终止液

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需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

样品的稀释

在血清稀释板中按1:100的体积比稀释待检血清。

注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔,阳性对照2孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

2. 盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。

3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

4. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次, 方法同3切记最后在干净吸水纸上拍干。

6. 每孔加显色液100µl,轻微震荡混匀、盖上封板膜37闭光显色10分钟

7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD<0.2,同时阳性对照(P)OD值〉0.4。

计算方法:

样品OD值÷阳性对照OD均值= S/P值

阴阳性判断:

S/P<0.35判为阴性;

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