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H7亚型禽流感抗体检测试剂盒 (鸡、鸭、鹅等禽类通用) 使用说明书

H7亚型禽流感抗体检测试剂盒

(鸡、鸭、鹅等禽类通用)

使用说明书

版号:H7 se180410

介绍

H7亚型禽流感抗体检测试剂盒检测家禽、野禽等动物血清中的H7亚型禽流感抗体,用于评估禽流感疫苗免疫状况及感染禽类的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被H7抗原,运用单克隆抗体与血清中的抗体竞争固相载体中的结合位点,从而间接检测血清中的抗H7禽流感抗体。在试验中,加入待检血清及酶标记物(抗H7单克隆抗体标记),经过温育后,若样品中含有H7病毒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,从而阻碍了酶标记物与抗原的结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,在微孔中加入TMB底物显色,样本的吸光度值与其所含有的抗体的含量成负相关,从而达到检测样品中抗体的目的。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2块

7

阴性对照

200µl

2

酶结合物

6/12ml

8

阳性对照

200µl

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

9

封板膜

2/4张

4

显色液

11/21ml

10

说明书

1份

5

终止液

15ml




6

 

样本稀释液

100ml




 

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. 显色液不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),待检验板条每孔均需加入样本稀释液40ul,然后将待检血清10μl加入检测板,同时设阴性2孔和阳性对照1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中;

2. 在样本以及阴阳性对照混匀后,每孔加入50μl酶标记物。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

3. 盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗6次。每次用洗涤液注满板孔(约250μl),且每次需将洗涤液甩干。洗涤6次后在干净吸水纸上拍干。

5. 每孔显色液100ul盖上封板膜37闭光显色10分钟

6. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD均值>0.5;

阳性对照(P)OD值/阴性对照(N)OD均值 < 0.4。

计算方法:

样品OD值/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断:

S/N值0.5则判断为阴性;

S/N值<0.5则判断为阳性。

 

有效期

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com


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H7亚型禽流感抗体检测试剂盒检测家禽、野禽等动物血清中的H7亚型禽流感抗体,用于评估禽流感疫苗免疫状况及感染禽类的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被H7抗原,运用单克隆抗体与血清中的抗体竞争固相载体中的结合位点,从而间接检测血清中的抗H7禽流感抗体。在试验中,加入待检血清及酶标记物(抗H7单克隆抗体标记),经过温育后,若样品中含有H7病毒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,从而阻碍了酶标记物与抗原的结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,在微孔中加入TMB底物显色,样本的吸光度值与其所含有的抗体的含量成负相关,从而达到检测样品中抗体的目的。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2块

7

阴性对照

200µl

2

酶结合物

6/12ml

8

阳性对照

200µl

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

9

封板膜

2/4张

4

显色液

11/21ml

10

说明书

1份

5

终止液

15ml




6

 

样本稀释液

100ml




 

需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. 显色液不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)。

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

 

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),待检验板条每孔均需加入样本稀释液40ul,然后将待检血清10μl加入检测板,同时设阴性2孔和阳性对照1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中;

2. 在样本以及阴阳性对照混匀后,每孔加入50μl酶标记物。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

3. 盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗6次。每次用洗涤液注满板孔(约250μl),且每次需将洗涤液甩干。洗涤6次后在干净吸水纸上拍干。

5. 每孔显色液100ul盖上封板膜37闭光显色10分钟

6. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是

阴性对照(N)OD均值>0.5;

阳性对照(P)OD值/阴性对照(N)OD均值 < 0.4。

计算方法:

样品OD值/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断:

S/N值0.5则判断为阴性;

S/N值<0.5则判断为阳性。

 

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有效期 12个月。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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