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犬包虫病抗原检测试剂盒使用说明书 (双抗体夹心法)

犬包虫病抗原检测试剂盒使用说明书

(双抗体夹心法)

版号:Hyd-Ag KITW450.01.01


介绍

犬包虫病抗原检测试剂盒(Echinococcus Granulosus Antigen Test Kit)用于检测犬粪中细粒棘球绦虫抗原。

本试剂盒采用双抗体夹心法,在酶标板条微孔上预包被抗细粒棘球绦虫单克隆抗体。在实验中,加入待检样品,经过温育后,若样品中含有细粒棘球绦虫抗原,则与包被板上的单抗结合;经洗涤后除去未结合的抗原,再加入酶结合物,与包被板上的单抗-抗原结合形成单抗-抗原-酶结合物复合物;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入显色液,经酶催化形成的蓝色信号与样本中的抗原含量成正比。加入终止液终止反应后,用酶标仪 450 nm 波长测定反应孔中的吸光度 OD 值。

 

组份

包被板

1 /2

底物 A 液

6 mL/12 mL

阴性对(NC)

2 mL

底物 B 液

6 mL/12 mL

阳性对(PC)

2 mL

终止液

12 mL

酶结合物浓液

1.5mL/3mL

20×浓涤液

30 mL

酶结合物稀液

15mL/30mL

盖板膜

1 张/2 张

样本稀释液

30 mL/60 mL

血清稀释板

1 块/2 块

10×犬粪处液

30 mL

说明书

1 份

 

需自备的设备及试剂

微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm/630 nm)、去离子水、离心机3000 rpm)、恒温培养箱(37℃)、计时器等。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用后放回 2-8℃保存。

2. 不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

3. 底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

4. 待检样本数量较多时,应先稀释完所有待检样本,再加到酶标板板上,使反应时间一致。

5. 稀释 20×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。

6. 移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

7. 应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

 

操作步骤

一、试剂配制

1. 洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5-10 min),然后用蒸馏水作 20 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 570 mL 蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液 2-8℃可存放 7 日。

2. 犬粪处理液:使用前,犬粪处理液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5-10 min),然后用蒸馏水作 10 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩样本稀释液加上 270 mL 蒸馏水)混匀,稀释好的样本稀释液 2-8℃可存放 7 日。

二、样品处理

1.  将采集来的新鲜样本在-70℃冷冻一周后室温解冻取 1 g 样本,加 1 mL 犬粪处理液,4000 rpm 离心 15 min,取上清。

2.  在血清稀释板中按1:50的体积稀释样本(245µL样本稀释液中加5µL待检样本),充分混匀。

三、操作步骤

1. 取包被板(根据样本多少,可拆开分次使用),设阳、阴性对照各 2 孔,加入阴、阳性对照100µL/孔;其他孔加入样本稀释液80µL/孔,然后加入待测样品上清液20µL/孔。轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,37℃避光反应 30 min

2. 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液 300 µL,静置 1 min 后,弃去洗涤液。洗涤 4 次后在吸水纸上拍干。

3. 配制酶结合物工作液:按1:10(1份酶结合物浓缩液+9份酶结合物稀释液)混匀。

4. 每孔加入酶结合物工作液100µL,盖上封板膜,37℃避光反应 30 min

5. 弃去孔中的溶液,洗涤 4 次,方法同 2

6. 将底物 A 液与底物 B 液按 1:1 混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,37℃避光反应 10min

7. 每孔加入终止液 50 µL5 min 内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于 450 nm630 nm 作参比波长)读取吸光度 OD 值。

试验成立的条件是:

阴性对照孔 OD 均值<0.5,阳性对照孔 OD 均值>0.8,阳性对照孔 OD 均值>临界值,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

临界值(CUTOFF)计算:

临界值=阴性对照孔 OD 均值×2.1

阴阳性判断:

阴性:样品 OD 值<临界值

阳性:样品 OD ≥临界值

 

有效期

2-8℃避光保存,有效期为 12 个月。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

南京杜佰生物科技有限公司   出品

电话: 025-6611 8188/6601 8988

手机:178 9500 6881

网址: www.bioduby.com

邮箱: bioduby@163.com

 


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犬包虫病抗原检测试剂盒使用说明书

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犬包虫病抗原检测试剂盒(Echinococcus Granulosus Antigen Test Kit)用于检测犬粪中细粒棘球绦虫抗原。

本试剂盒采用双抗体夹心法,在酶标板条微孔上预包被抗细粒棘球绦虫单克隆抗体。在实验中,加入待检样品,经过温育后,若样品中含有细粒棘球绦虫抗原,则与包被板上的单抗结合;经洗涤后除去未结合的抗原,再加入酶结合物,与包被板上的单抗-抗原结合形成单抗-抗原-酶结合物复合物;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入显色液,经酶催化形成的蓝色信号与样本中的抗原含量成正比。加入终止液终止反应后,用酶标仪 450 nm 波长测定反应孔中的吸光度 OD 值。

 

组份

包被板

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底物 A 液

6 mL/12 mL

阴性对(NC)

2 mL

底物 B 液

6 mL/12 mL

阳性对(PC)

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终止液

12 mL

酶结合物浓液

1.5mL/3mL

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样本稀释液

30 mL/60 mL

血清稀释板

1 块/2 块

10×犬粪处液

30 mL

说明书

1 份

 

需自备的设备及试剂

微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm/630 nm)、去离子水、离心机3000 rpm)、恒温培养箱(37℃)、计时器等。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用后放回 2-8℃保存。

2. 不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

3. 底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

4. 待检样本数量较多时,应先稀释完所有待检样本,再加到酶标板板上,使反应时间一致。

5. 稀释 20×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。

6. 移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

7. 应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

 

操作步骤

一、试剂配制

1. 洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5-10 min),然后用蒸馏水作 20 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 570 mL 蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液 2-8℃可存放 7 日。

2. 犬粪处理液:使用前,犬粪处理液应恢复至室温(20-25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5-10 min),然后用蒸馏水作 10 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩样本稀释液加上 270 mL 蒸馏水)混匀,稀释好的样本稀释液 2-8℃可存放 7 日。

二、样品处理

1.  将采集来的新鲜样本在-70℃冷冻一周后室温解冻取 1 g 样本,加 1 mL 犬粪处理液,4000 rpm 离心 15 min,取上清。

2.  在血清稀释板中按1:50的体积稀释样本(245µL样本稀释液中加5µL待检样本),充分混匀。

三、操作步骤

1. 取包被板(根据样本多少,可拆开分次使用),设阳、阴性对照各 2 孔,加入阴、阳性对照100µL/孔;其他孔加入样本稀释液80µL/孔,然后加入待测样品上清液20µL/孔。轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,37℃避光反应 30 min

2. 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液 300 µL,静置 1 min 后,弃去洗涤液。洗涤 4 次后在吸水纸上拍干。

3. 配制酶结合物工作液:按1:10(1份酶结合物浓缩液+9份酶结合物稀释液)混匀。

4. 每孔加入酶结合物工作液100µL,盖上封板膜,37℃避光反应 30 min

5. 弃去孔中的溶液,洗涤 4 次,方法同 2

6. 将底物 A 液与底物 B 液按 1:1 混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,37℃避光反应 10min

7. 每孔加入终止液 50 µL5 min 内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于 450 nm630 nm 作参比波长)读取吸光度 OD 值。

试验成立的条件是:

阴性对照孔 OD 均值<0.5,阳性对照孔 OD 均值>0.8,阳性对照孔 OD 均值>临界值,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

临界值(CUTOFF)计算:

临界值=阴性对照孔 OD 均值×2.1

阴阳性判断:

阴性:样品 OD 值<临界值

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